معرفی دستگاه الایزا ریدر (ELISA Reader)
معرفی ELISA Reader که با نام‌های Microplate Reader / Plate Reader هم شناخته می‌شود، دستگاهی برای اندازه‌گیری شدت سیگنال نوری در چاهک‌های میکروپلیت (معمولاً 96 یا 384 خانه) است. رایج‌ترین حالت در آزمون‌های ELISA، اندازه‌گیری جذب نوری (Absorbance) در طول موج مشخص (مثل 450 نانومتر برای سوبسترای TMB) است. شدت جذب با مقدار محصول رنگی تشکیل‌شده متناسب بوده و در نهایت به غلظت آنالیت (آنتی‌ژن/آنتی‌بادی/هورمون و…) مرتبط می‌شود.

بسیاری از مدل‌ها امکان خوانش دوطول‌موجی (Dual wavelength) برای تصحیح پس‌زمینه، خوانش Kinetic (زمانی) و گاهی خوانش Fluorescence/Luminescence را نیز دارند.

نکات ایمنی
  • ایمنی زیستی نمونه‌ها: بسیاری از کیت‌های ELISA با سرم/پلاسما/نمونه‌های انسانی یا حیوانی انجام می‌شوند. تمام نمونه‌ها را بالقوه آلوده در نظر بگیرید و از دستکش، روپوش و محافظ چشم استفاده کنید.
  • مواد شیمیایی خورنده: محلول Stop در بسیاری از کیت‌ها اسید سولفوریک یا اسید فسفریک است. تماس پوستی/چشمی خطرناک است؛ هنگام کار با Stop Solution حتماً عینک ایمنی و دستکش مناسب استفاده شود و در صورت تماس، مطابق SDS اقدام شود.
  • آئروسل و پاشش: در مرحله پیپت‌کردن و شست‌وشو، پاشش قطرات و آئروسل ممکن است. پیپت‌کردن آرام، استفاده از نوک سمپلر فیلتر‌دار (در صورت حساسیت به آلودگی) و کار روی پد جاذب توصیه می‌شود.
  • پیشگیری از آلودگی متقاطع: نوک سمپلر برای هر نمونه تعویض شود. از تماس نوک با دیواره چاهک‌های مجاور جلوگیری کنید.
  • ایمنی الکتریکی و حفاظت دستگاه: از ریختن محلول روی دستگاه یا داخل محفظه جلوگیری کنید. نشت مایعات می‌تواند به اپتیک و بردهای الکترونیکی آسیب بزند.
  • حمل و قرارگیری پلیت: پلیت را با دو دست نگه دارید و از ضربه یا کج‌شدن جلوگیری کنید تا محتویات بین چاهک‌ها جابه‌جا نشود.
  • دفع پسماند: پسماندهای زیستی و محلول‌های اسیدی/قلیایی باید جداگانه و مطابق دستورالعمل دانشگاه/آزمایشگاه دفع شوند.
روش استفاده
  • انجام کامل مراحل ELISA طبق کیت (انکوباسیون‌ها، شست‌وشوها، افزودن کونژوگه، سوبسترا و Stop).
  • اطمینان از نبود حباب در چاهک‌ها (حباب می‌تواند خوانش را مختل کند).
  • انتخاب طول موج اصلی و در صورت توصیه، طول موج مرجع (مثلاً 450 و 620–650 nm).
  • تعریف Layout استانداردها، کنترل‌ها، بلانک و نمونه‌ها در نرم‌افزار.
  • خوانش پلیت (Endpoint یا Kinetic) و ذخیره داده خام.
  • تحلیل: کم کردن بلانک، محاسبه CV تکرارها، رسم منحنی استاندارد (معمولاً 4PL/5PL) و گزارش نتایج
 کاربردها
  • سنجش آنتی‌ژن/آنتی‌بادی در ایمونولوژی و تشخیص طبی
  • اندازه‌گیری سایتوکاین‌ها، هورمون‌ها، مارکرهای التهابی و توموری
  • آزمون‌های رنگ‌سنجی میکروپلیتی در بیوشیمی
  • کاربردهای کنترل کیفیت و پژوهش‌های زیست‌پزشکی
دروس مرتبط بیوشیمی پزشکی  ، باکتری شناسی

امکان درج دیدگاه بسته شده است