مرکز آموزش عالی علوم پزشکی وارستگان

اساس کار :PCR

(Denaturation): پیوندهای هیدروژنی بین دو رشته DNA شکسته شده و دو رشته از هم جدا می‌شوند.

(Annealing):  آغازگرهای کوتاه و مکمل با توالی خاص به رشته‌های DNA متصل می‌شوند.

(Extension):  آنزیم DNA پلیمراز ، رشته‌های جدید DNA را می‌سازد.

اجزای اصلی دستگاه PCR

بلوک حرارتی: قسمتی که لوله‌های حاوی نمونه را در خود جای می‌دهد و دما را به صورت دقیق کنترل می‌کند.

منبع تغذیه: تأمین انرژی مورد نیاز برای کارکرد دستگاه.

کنترل کننده: تنظیم دما، زمان و تعداد سیکل‌های واکنش

نمایشگر: نمایش اطلاعات مربوط به واکنش

اجزای اصلی واکنش: PCR

DNA الگو

پرایمر فوروارد و پرایمر ریورس

dNTP

Mgcl2

DNAپلیمراز

بافر

آب مقطر

• قبل از استفاده، همیشه دستورالعمل‌های سازنده را به دقت مطالعه کنید.
• قبل از هر بار استفاده، دستگاه را از نظر هرگونه آسیب یا نقص بررسی کنید .
• قسمت‌های مختلف دستگاه ممکن است بسیار داغ شوند، از تماس مستقیم با آن‌ها خودداری کنید.
• از آلودگی دستگاه با نمونه‌ها یا معرف‌ها جلوگیری کنید.
• به طور کلی، توصیه می شود که دستگاه PCR پس از هر بار استفاده با محلول الکل ایزوپروپیل تمیز شود. همچنین، باید به صورت دوره ای (مثلاً هر هفته یا هر ماه) تمیز کردن عمیق تری با استفاده از محلول های ضدعفونی کننده قوی تر انجام شود.
• فاصله از دستگاه های گرمازا: دستگاه PCR را از دستگاه های گرمازا مانند انکوباتورها و حمام های آب دور نگه دارید تا از افزایش بیش از حد دما در محیط آزمایشگاه جلوگیری شود.
• فاصله از دستگاه های تولید کننده ارتعاش: ارتعاشات می توانند بر دقت نتایج PCR تأثیر بگذارند. بنابراین، دستگاه PCR را از دستگاه هایی که ارتعاشات زیادی تولید می کنند، مانند سانتریفیوژهای با سرعت بالا، دور نگه دارید.
• فاصله از منابع آلودگی: دستگاه PCR را از منابع آلودگی مانند اتوکلاو و محلول های شیمیایی دور نگه دارید تا از آلودگی نمونه ها جلوگیری شود.
• برای اتصال دستگاه PCR، به برق و ولتاژ مشخص شده روی برچسب مشخصات فنی دستگاه نیاز دارید. این اطلاعات معمولاً به صورت ولتاژ (مثلاً 220 ولت یا 110 ولت) مطابق با برق شهری و جریان (آمپر) ذکر شده است.
• فرکانس برق نیز مهم است و معمولاً 50 یا 60 هرتز است. اطمینان حاصل کنید که فرکانس برق شما با فرکانس مورد نیاز دستگاه مطابقت دارد.

مراحل پس از اتمام آزمایش PCR:

خاموش کردن و قطع برق دستگاه

سرد کردن دستگاه

حذف لوله‌های واکنش

تمیز کردن دستگاه

ثبت اطلاعات

تهیه مخلوط واکنش: ابتدا مخلوط واکنش را آماده کنید که شامل DNA الگو، پرایمر، (dNTP)، بافر و آنزیم DNA پلیمراز است.

اضافه کردن نمونه به لوله‌های PCR

قرار دادن لوله‌ها در دستگاه

تنظیم برنامه PCR:

ورود اطلاعات: برنامه PCR را در دستگاه وارد کنید. این برنامه شامل تعداد سیکل‌ها، دمای هر مرحله و مدت زمان هر مرحله است.

مراحل اصلی برنامه:  دناتوراسیون ،اتصال آغازگر، امتداد

اجرای برنامه:

تغییر دما: دستگاه به طور خودکار دمای بلوک حرارتی را طبق برنامه تنظیم شده تغییر می‌دهد.

تکرار سیکل‌ها: سیکل‌های PCR به تعداد مشخصی تکرار می‌شوند تا تعداد نسخه‌های DNA مورد نظر به دست آید

آنالیز محصولات: پس از اتمام واکنش، محصولات PCR را با استفاده از روش الکتروفورز بر روی ژل آگارز بررسی کنید.

تفسیر نتایج: با مشاهده باندهای DNA بر روی ژل، می‌توانید به وجود یا عدم وجود قطعه DNA مورد نظر پی ببرید.

پزشکی قانونی و تعیین هویت

تشخیص قبل از تولد جنین و قبل از لانه گزینی جنین

مهندسی ژنتیک و ژن درمانی

تشخیص انواع مختلف سرطان

تشخیص عفونتهای باکتریایی و ویروسی